بررسی خصوصیات ایمنی زایی پروتئین نوترکیب زنجیره ی سبک سم بوتولینوم تیپ a(۸۴۰)

Authors

سید لطیف موسوی

sl mousavi جعفر امانی

j amani شهرام نظریان

sh nazarian رحیم سروری زنجانی

r sorouri zanjani

abstract

چکیده زمینه و هدف: سم بوتولینوم تیپa به لحاظ ساختاری از یک زنجیره ی سبک به وزن50 کیلودالتون و یک زنجیره ی سنگین به وزن 100 کیلو دالتون تشکیل شده است که توسط یک باند دی سولفید به هم متصل شده اند. این پروتئین شامل سه بخش (domain) است که بخش زنجیره ی سبک آن دارای فعالیت آنزیمی می باشد. در این پژوهش، هدف ما از تولید نوترکیب بخش عملکردی به دست آوردن یک پروتئین مناسب جهت بررسی ایمنی زایی آن است. روش بررسی: باکتری در شرایط بی هوازی رشد داده شد سپس dna کروموزومی به روش قلیایی استخراج گردید. پس از بررسی ترادف ژن مربوطه و طراحی پرایمر قطعه ی مورد نظر از طریق واکنش های زنجیره ای پلیمرازی(pcr) فراوان سازی شد. محصول pcr بر روی سه ناقل بیانی prseta ، pet28a و pet32aهمسانه سازی گردید. پروتئین حاصل از بیان توسطsds-page بررسی و صحت محصول با روش وسترن بلاتینگ و واکنش الیزا مورد تأیید نهایی قرار گرفت و سپس به وسیله ی کروماتوگرافی میل ترکیبی خالص سازی شد، ایمنی زایی بر روی موش سوری در سه مرحله صورت گرفت و نتایج آن مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: در این تحقیق بالاترین بیان در شرایط غلظت 5/0 میلی مولار iptg ، جذب نوری 6/0 و زمان القای 15 ساعت در دمای 30 درجه ی سانتی گراد به دست آمد. پروتئین بیان شده توسط ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی خالص سازی گردید. آنتی بادی حاصل از تزریق پروتئین نوترکیب توانست مانع از مرگ موش ها در دوز ld50 100 شود. نتیجه گیری: هر چند بیان ژن هایی با درصد بالایی از at در سیستم ecoli ضعیف می باشد ولی ما در این تحقیق توانستیم بیان مناسبی به دست آوریم. تخلیص پروتئین نوترکیب در مراحل اولیه به دلیل اتصال ضعیف هیستیدین انتهایی به ستون دشوار بوده که با تغییر در روش ها این پروتئین تا 90 درصد خالص سازی شد. در بحث ایمنی زایی پروتئین نوترکیب مورد نظر نیز مشخص شد که آنتی بادی های تولید شده در مقایسه با آنتی بادی تولید شده علیه بخش اتصال دهنده از ایمنی زایی پایینی برخوردار است.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بررسی خصوصیات ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب زنجیره‌ی سبک سم بوتولینوم تیپ A(840)

Background and Objective: Botulinum neurotoxin type A, structurally consists of a 50KD light chain and a 100 KD heavy chain linked by a disulfide bond. The protein can further be divided into three functional domains of which catalytic domain corresponds to the light chain. In this research we aimed to produce recombinant catalytic domain in order to obtain a protective protein. Materials and M...

full text

بررسی ایمنی زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در موش

چکیده سابقه و هدف: نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم از قوی ترین سموم شناخته شده می باشند که سبب بروز سندروم خطرناک بوتولیسم در انسان و حیوان می شوند. تحقیقات نشان داده است که زیر واحد اتصالی این سم دارای خاصیت ایمنی زایی بوده و میتواند در تهیه واکسن نوترکیب مورد استفاده قرار گیرد. از آن جا که واکسن های نوترکیب به تنهایی قادر به برانگیختن موثر پاسخ های ایمنی نیستند، استفاده از ادجوانت ...

full text

ارزیابی بیان نوترکیب زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ ‌A‌ متصل به یک پپتید ‌ نفوذ کننده به سلول ‌

سابقه و هدف: توکسین بوتولینوم تیپ A امروزه به طور گسترده ای به صورت تزریقی در درمان برخی اختلالات انقباضی ماهیچه‌هابه کار می رود.این مطالعه به منظور تولیدپروتئین نوترکیب حاصل از اتصال کوالان زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) به پپتید TAT(47-57)وهمچنین شرایط مناسببرای افزایشبیان و تخلیص این پروتئین انجام شد. مواد و روش­ ها:در این مطالعه بنیادی توالی نوکلئوتیدی زنجیره سبک توکسین بوتولینو...

full text

بررسی ایمنی‌زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال‌دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

Abstract Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate...

full text

بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب (stxb) شیگلا دیسانتری تیپ ۱ در موش سوری

زمینه و هدف: شیگلوز عفونت حادّ روده ای حاصل از شیگاتوکسین و توکسین های شبه شیگاست که توسط باکتری شیگلا و باکتری اشرشیا کلی انتروهموراژیک (ehec) و اشرشیا انتروتوکسینوژنیک (etec) ایجادمی شود. این بیماری، میزان شیوع بالایی در جهان دارد و به عنوان یک عامل بیوتروریستی شناخته می شود. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب stxb و نانوالیاف حاوی پروتئین stxb به صورت تجویز نازالی و تزریقی می ...

full text

بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب (stxb) شیگلا دیسانتری تیپ 1 در موش سوری

زمینه و هدف: شیگلوز عفونت حادّ روده ای حاصل از شیگاتوکسین و توکسین های شبه شیگاست که توسط باکتری شیگلا و باکتری اشرشیا کلی انتروهموراژیک (ehec) و اشرشیا انتروتوکسینوژنیک (etec) ایجادمی شود. این بیماری، میزان شیوع بالایی در جهان دارد و به عنوان یک عامل بیوتروریستی شناخته می شود. هدف از این مطالعه بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب stxb و نانوالیاف حاوی پروتئین stxb به صورت تجویز نازالی و تزریقی می ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجان

جلد ۱۵، شماره ۵۹، صفحات ۲۱-۳۴

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023